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    生化檢驗并不是你想的那么簡(jiǎn)單!

    作者:admin | 發(fā)布時(shí)間:2019-01-11 | 游覽:1873

    內容摘要:生化檢驗是醫學(xué)檢驗重要的一部分,其特點(diǎn)是定量檢測。是否使用了先進(jìn)的儀器設備、合格的試劑、有資質(zhì)的人員就能做好生化項目檢驗?多數情況下是肯定的,但實(shí)際工作中還會(huì )出現這樣那樣的失控,甚至不得其解。這需要我們多總結遇到的問(wèn)題,研究項目的原理,做工作中的有心人,才能不斷提高檢驗水平。

    生化檢驗是醫學(xué)檢驗重要的一部分,其特點(diǎn)是定量檢測。是否使用了先進(jìn)的儀器設備、合格的試劑、有資質(zhì)的人員就能做好生化項目檢驗?多數情況下是肯定的,但實(shí)際工作中還會(huì )出現這樣那樣的失控,甚至不得其解。這需要我們多總結遇到的問(wèn)題,研究項目的原理,做工作中的有心人,才能不斷提高檢驗水平。


    一、標本及時(shí)分離與測定

     

    標本的及時(shí)分離及測定是體現樣本真實(shí)結果的重要保證。利用NADH轉化為NAD 變化率來(lái)檢測其物質(zhì)含量的試驗都或多或少受到血液存放時(shí)間的影響。原因是全血存放時(shí)間越長(cháng),紅細胞利用血清中的糖進(jìn)行無(wú)氧酵解產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸使NADH轉化為NAD ,這樣使測定結果假性升高,如ALT、AST、BUN、CK、LDH、HBDH等。此外,由于糖酵解,血中GLU隨著(zhù)存放時(shí)間的延長(cháng)約以5-7%/小時(shí)的速度降低。因此,一定要作好與臨床的溝通,對抽血和標本運送人員進(jìn)行培訓;收到標本后及時(shí)分離血清并檢測;也可將全自動(dòng)生化分析儀上的延遲時(shí)間設置大于60秒,這樣試劑在延遲期內消除丙酮酸的干擾,可完全避免假陽(yáng)性結果的出現。


    二、抗凝劑的使用


        目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-2K、肝素、枸鹽酸鈉等,TBA和AFU不能用肝素抗凝劑,因為肝素會(huì )使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁,導致吸光度假性偏高,從而使檢測結果偏高。所以認真參閱試劑說(shuō)明書(shū),按照要求采集正確標本。


    三、儀器用水

      

    合格的儀器用水是保證生化結果的一個(gè)重要環(huán)節。測定離子類(lèi)的項目:比如銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷,在使用過(guò)程中,儀器用水的質(zhì)量相當重要,雖然現在一般醫院的生化儀都帶有制水系統,但制水系統基本都是制備去離子水,離子交換樹(shù)脂在使用一段時(shí)間后交換能力明顯下降,需要定期進(jìn)行更換,否則制備的水離子含量多,電導率偏高。使用含離子超標的水沖洗儀器,直接影響檢驗結果。再如血氨、二氧化碳項目,如果水質(zhì)不好,儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高,則檢測該項目的結果也會(huì )受到嚴重的影響。如果血清中含有GLDH,而儀器用水存在氨時(shí),可消耗NADH,使利用NADH的酶聯(lián)連續監測法結果偏高。所以需要定期監測水質(zhì),當儀器用水的電阻小于1.0M?時(shí)要及時(shí)更換離子交換樹(shù)脂或活性炭。 

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    四、交叉污染 


    在使用全自動(dòng)生化分析儀的過(guò)程中,可能會(huì )遇到這樣的情況:?jiǎn)为氉瞿硞€(gè)項目時(shí)結果沒(méi)有問(wèn)題,可是將它與某些項目組合在一起時(shí),結果卻出現異常。這種現象首先就要考慮交叉污染。交叉污染是在生化分析儀中比較常見(jiàn)的現象,其中的原因是全自動(dòng)生化分析儀的清洗系統隨著(zhù)儀器使用時(shí)間的累加,清洗效果逐漸下降,試劑交叉污染的程度增加所致。全自動(dòng)生化分析儀各試劑間的相互干擾影響到了檢驗結果的準確性和可靠性,給檢驗結果帶來(lái)很大的偏差。只要我們找出其中的規律,就可以避免這種情況的發(fā)生。以下兩種情況較為多見(jiàn):


    (1) 生化分析儀清洗問(wèn)題造成的交叉污染


    生化分析儀的交叉污染主要來(lái)源于:樣品針、試劑針、攪拌棒和比色杯。由于全自動(dòng)生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑,一般難以徹底清洗干凈,所以容易造成分析項目的攜帶污染.而生化項目的測定往往僅需要幾微升樣本,試劑往往需要幾百微升,尤其在沒(méi)有自動(dòng)沖洗程序的流動(dòng)池式生化分析儀上,由于前帶現象的存在,如果前一個(gè)樣本為高值樣本,則接后的第一個(gè)低值標本結果應慎重報告。不僅沒(méi)有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現象,就是具有自動(dòng)沖洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于長(cháng)期頻繁的利用,加樣針和試劑針的注射器磨損加重、注射器的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換等原因,使吸樣針或試劑針密封層增大,產(chǎn)生泄漏現象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個(gè)重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準確,通常導致利用速率法測試的標本系統偏低或偏高。速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的,如果加樣體積或加試劑體積不準,導致真正速率計算因子和理論計算因子偏離,從而使檢測結果不準確。此外,還有攪拌棒涂層出現破損、比色杯磨損或沖洗泵故障等引起的結果偏差。為避免上述交叉污染出現,需按照要求定期進(jìn)行儀器維護保養,及時(shí)更換零部件,并定期對儀器進(jìn)行校準。 


    (2)檢驗項目間的交叉污染


    一個(gè)項目會(huì )影響緊隨其后項目的測試結果,造成這種影響的原因是前者試劑中含有后者試驗的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結果;或者前者試劑中含有改變后者試驗反應條件或影響其反應進(jìn)程的物質(zhì)而間接干擾其測試結果。例如,在TP試劑中含有大量的CuSO4,如果將Cu放在TP項目的后面檢測,會(huì )使檢測結果偏高或重復性差。P放在含有磷酸鹽的項目后面,TBA放在含有膽酸鹽的項目后面,如CH,都會(huì )使檢測結果偏高或重復性差。GLU放在CK和CK—MB的項目后面可能會(huì )使檢測結果偏高或重復性差。原因是CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)試劑中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應過(guò)程,因此可能對Glu測定帶來(lái)干擾,尤其對Glu的HK法測定可能帶來(lái)嚴重干擾。此外,相鄰兩個(gè)項目的PH值相差太大或對PH要求嚴格的項目,也會(huì )對測定的結果產(chǎn)生影響,比如TP和Alb之間PH相差較大,會(huì )互相干擾,TBA放在A(yíng)lb后面測定,會(huì )使測定結果偏低。大多數酶反應pH值在6.0-7.5之間;ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下適宜。解決此類(lèi)交叉污染,需要了解項目試劑組成、反應的原理、所需的條件,來(lái)調整合適的實(shí)驗順序;在造成污染的項目和受污染的項目之間設置加強清洗。 


    五、試劑使用


    (1)正確設置參數

      

    生化分析儀上通常有分析程序供用戶(hù)設定,包括樣品量、試劑量、波長(cháng)、分析方式和延遲時(shí)間、測試時(shí)間等。下面就延遲時(shí)間和加樣程序的設定來(lái)說(shuō)明如何正確使用分析參數。以肌酐苦味酸測定法為例,苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物,而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性干擾,所以延遲時(shí)間好設定為50~6O秒之間,測定時(shí)間小于6O秒,這樣就充分消除了快反應和慢反應干擾,從而檢測到真正肌酐含量。此外,試劑說(shuō)明書(shū)中關(guān)于參數的設置是經(jīng)過(guò)廠(chǎng)家驗證合理有效的,但仍需根據本實(shí)驗室條件、儀器狀態(tài)和樣本結果進(jìn)行綜合觀(guān)察,可以做適當調整以達到適合本實(shí)驗室的檢測要求。   


    (2)校準液的使用  


    目前生產(chǎn)廠(chǎng)家提供的校準液只適用于某一特定的分析系統,同一項目不同方法學(xué)的校準液不能混用,比如膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準液校準,TBA循環(huán)酶法用比色法校準液校準等都會(huì )造成測定結果不準確。甚至同一方法學(xué),不同廠(chǎng)家的校準品和試劑都會(huì )有所差異。所以建議選擇適合自已實(shí)驗室的校準品,與理論計算的factor值差異不大,沒(méi)有發(fā)現有明顯的影響因素,如有條件可進(jìn)行系統溯源。在實(shí)現溯源性目標過(guò)程中,以患者新鮮標本為實(shí)驗對象,以方法學(xué)對比試驗為驗證手段。 


    (3)開(kāi)瓶穩定性


    開(kāi)瓶穩定性也是檢驗試劑質(zhì)量是否過(guò)硬的一個(gè)指標。目前就某些項目的方法學(xué)來(lái)講,還達不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內放很長(cháng)時(shí)間不需要定標,比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑,開(kāi)瓶后試劑會(huì )吸收空氣中的二氧化碳,使試劑本身的PH值下降,如果長(cháng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標或校準,會(huì )使檢測結果發(fā)生偏離,有些實(shí)驗室為了方便,很長(cháng)時(shí)間都不作校準,導致測定結果的不準確。所以上機試劑量要根據本實(shí)驗室的標本量來(lái)定,放置1~2天的用量即可,試劑瓶在儀器內使用時(shí)間不要過(guò)長(cháng),及時(shí)更換。根據試劑特性,及時(shí)對項目進(jìn)行校準。   


    (4)不同批號試劑相混


    將不同批號的試劑混合在一起使用的現象在工作中經(jīng)常發(fā)生,但是由于不同批號的試劑生產(chǎn)時(shí)間不同,試劑中工具酶的活性會(huì )有差異,會(huì )發(fā)生水解的底物濃度隨時(shí)間長(cháng)短也會(huì )不同。因此混在一起使用而又不定標,可能會(huì )導致檢測結果的不準確。還有如果有的試劑開(kāi)瓶時(shí)間太長(cháng),空氣中的灰塵或細菌會(huì )進(jìn)入瓶中,由于有的試劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽,是細菌生長(cháng)的好條件,雖然有的試劑添加了防腐劑,但防腐劑的防腐也是有一定限度的,而且絕大多數廠(chǎng)家的試劑中是沒(méi)有防腐劑的。所以建議不同批號試劑不要混用,如果混用好重新定標;多個(gè)試劑瓶剩余不同批號的試劑,可以留起來(lái)待一定數量后混在一起,然后重新定標后使用。


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